발사르탄 의약품 중 니트로소디메틸아민 분석법

1. 표준시료의 조제

❍ 표준원액의 조제

N-니트로소디메틸아민(N-nitrosodimethylamine, NDMA) 표준물질을 메탄올에 녹여 농도가 1,000 ng/mL가 되도록 하여 표준원액으로 한다.

❍ 내부표준원액의 조제

N-니트로소디메틸아민-d6(IS) 표준물질을 메탄올에 녹여 농도가 300 ng/mL가 되도록 하여 내부표준원액으로 한다.

❍ 표준액의 조제

표준원액 일정량을 정확하게 취하여 메탄올로 희석하여 표준물질의 농도가 각각 10 ~ 200 ng/mL가 되도록 한다. 이때 내부표준물질의 농도를 일정하게 한다.

2. 검체시료의 조제

❍ 원료의약품

원료 약 ○○ g을 달아 메탄올을 넣어 녹인 후 내부표준액을 넣고 정확히 ○○ mL로 한다. 이 액을 여과하여 처음 여액은 버리고 다음 여액을 검액으로 한다.

❍ 완제의약품

이 약 20 정 이상을 가지고 그 질량을 정밀하게 달아 가루로 한다. 발사르탄 약 ○○ g에 해당하는 양을 정밀하게 달아 메탄올을 넣어 녹인 후 내부표준액을 넣고 정확히 ○○ mL로 한다. 이 액을 여과하여 처음 여액은 버리고 다음 여액을 검액으로 한다.

3. 기체크로마토그래프-질량분석기 조작조건

검체시료 및 표준시료를 가지고 다음 조건으로 기체크로마토그래프-질량분석법에 따라 시험하여 내부표준법에 따라 검량선을 작성하고, 검량선으로부터 검체 중 N-니트로소디메틸아민의 양을 구한다.

❍ 검출기 : 질량분석기(SIM mode)

❍ 칼  럼 : 안지름 0.25 mm, 길이 60 m의 용융실리카관의 내면에 기체크로마토그래프용 6% 시아노프로필, 94% 디메틸폴리실록산을 1.4 ㎛의 두께로 피복한 것(DB-624 또는 이와 동등한 것을 사용)

❍ 오븐온도 : 80 ℃로 2분간 유지하고 매분 20 ℃씩 240 ℃까지 승온 후 6분간 유지

❍ 검체도입부온도 : 220 ℃

❍ 운반기체 : 헬륨 (유속 1 mL/분)

❍ 분할 비 :  1 : 5

❍ 질량분석기 조건(선택이온모드)

질량분석기 조건	분석대상물질	대상이온(m/z)
		정량이온	확인이온
연결관 온도 250 ℃ 이온화 방법 EI 이온화부 온도 230 ℃ 검출부 온도 150 ℃	N-니트로소디메틸아민 내부표준물질 (N-니트로소디메틸아민-d6)	74	42 59
		80	46

❍ 시스템적합성

- 검출의 확인 : N-니트로소디메틸아민 10 ng/mL, 내부표준물질 60 ng/mL이 든 표준액 2μL씩을 가지고 위의 조건으로 조작할 때 내부표준물질의 피크면적에 대한 니트로소디메틸아민 피크면적비가 12∼ 25 %가 되는 것을 확인한다.

- 시스템의 재현성 : N-니트로소디메틸아민 50 ng/mL, 내부표준물질 60 ng/mL이 든 표준액 2 μL씩을 가지고 위의 조건으로 시험을 6회 반복할 때 내부표준물질의 피크면적에 대한 니트로소디메틸아민의 피크면적의 상대표준편차는 5.0 % 이하이다.

4. 참고사항

❍ 조작조건 중에서 칼럼의 안지름 및 길이, 고정상의 농도, 칼럼온도, 운반기체의 유량 및 분할비는 최적의 감도를 얻기 위해 변경할 수 있다. 다만 그 조작조건을 규정하는 방법보다 더 좋은 정확도와 정밀도를 얻을 수 있는 범위 내에서 변경할 수 있다.

❍ 발사르탄으로서 검체 1 g 중 NDMA의 정량한계는 0.1ppm(μg/g)이하이며, 검액의 농도는 검량선 범위내로 조절하여 사용한다.

* 시험법에 문의가 있을 경우에는 의약품연구과 정래석 연구관(043-719-4605)에게 연락하시기 바랍니다.