생물학적제제기준및시험방법중개정

1. 개정이유

가. 생물학적제제 각조 중 ‘경피용 건조 비씨지백신 (일본균주)’을 자가 기준 및 시험방법의 심사 결과에 따라서, 제제의 특성과 국제적인 흐름에 맞게 개정하려는 것임.

나. 생물학적제제 각조 중 ‘클로스트리듐 보툴리눔 A형 독소-혈구응집소 복합체’를  민원인의 고시 개정 요청 심사 결과에 따라서, 제제의 특성과 국제적인 흐름에 맞게 개정하려는 것임.

2. 주요내용

가. 생물학적제제 각조 중 “경피용 건조 비씨지백신 (일본균주)”항의 1. 정의, 2.제조방법 및 시험기준, 3.완제의약품의 항을 전면 개정함.

나. 생물학적제제 각조 중 “클로스트리듐 보툴리눔 A형 독소-혈구응집소 복합체”항의 3.7 확인시험함, 3.8 역가시험항을 개정함

3. 참고사항

가. 관계법령 : 약사법제44조 및 동법시행규칙 제62조

나. 규제심사 : 신설․강화 규제사항 없음

다. 예산 : 별도조치 필요없음

라. 합의 : 해당사항 없음

마. 기타 : 개정내용은 식품의약품안전청 홈페이지(www.kfda.go.kr)를 참조하시기 바람.

식품의약품안전청 고시 제 200736호

약사법 제44조 제1항의 규정에 의한 생물학적제제기준및시험방법 (식품의약품안전청고시 제2007-13호, 2007. 2. 28)을 다음과 같이 개정 고시합니다.

2007년 6월 5일

식품의약품안전청장

생물학적제제기준및시험방법중개정

생물학적제제기준및시험방법중 다음과 개정한다.

IV. 생물학적제제 각조 중 ‘경피용 건조 비씨지 백신 (일본균주)’을 다음과 같이 개정한다.

IV. 생물학적제제 각조 중 ‘클로스트리듐 보툴리눔 A형 독소-혈구응집소 복합체’을 다음과 같이 개정한다.

경피용 건조 비씨지 백신(일본균주)

Freeze-dried BCG Vaccine for Percutaneous Use

(Japan strain)

정  의

명칭

이 제제는 「경피용 건조비씨지 백신(일본균주)」(B.C.G)이라 한다.

제제

이 제제는 Tokyo 172 균주로부터 얻어진 살아있는 칼멜게량(Bacillus of Calmete and Guèrin)균 (이하 “균”이라 한다)을 함유한 건조제제로서 1회용 앰플에 충전되어 있다.

용제를 가하였을 때 백색 또는 담황색의 혼탁한 액상제제로 된다.

제조방법 및 시험기준

재료

마스터 시드

Mycobacterium bovis (B.C.G.) Tokyo 172 strain을 사용한다.

제조용균주

일본 국립감염증연구소에서 마스터 시드로부터 제조된 working seed를 분양받아 제조용 균주로 사용한다. 제조용 균주를 멸균주사용수로 재구성한 후 소똥(Sauton) 계대 배양한다. 배지표면에 증식한 균을 글리세린 소담즙 감자배지에 접종하여 약 2주 간격으로 계대 배양한다. 교부 후 제조에 사용하기까지 이 계대는 12대를 초과하여서는 안된다. 배양온도는 37.5 ± 0.5 ℃로 하며 이하 배양온도는 이에 따른다.

제조용 균주에 대한 시험

제조용 균주에 대한 시험은 일본 국립감염증연구소에서 한다.

무균시험

검체 20 mL을 채취하여 액상치오글리콜산배지 I (TGC배지)에는 0.5 mL 및 1 mL씩 각각 8 개 접종하고 대두카제인소화배지 (SCD배지)에는 1 mL 씩 8 개에 접종한다. 각 배지의 용량은 15 mL로 한다. 접종 후 검체가 배지 전체에 퍼지도록 조용히 혼합한다. TGC배지는 30 ～ 35 ℃, SCD배지는 20 ～ 25 ℃에서 14일간 이상 배양해 5 ～ 9 일째 및 배양 최종일의 합계 2회, 균의 발육 유무를 관찰한다.

TGC 배지 및 SCD 배지 모두 균의 발육을 확인할 수 없을 때 적합으로 한다.

염색시험

검체를 생리식염수로 희석하여 1 mL 중 0.5 mg의 BCG 습균을 포함하도록 한 것을 시료로 한다. 시료 한 방울을 슬라이드 글라스에 떨어뜨리고 loop을 이용하여 넓게 칠한 후 건조해 화염고정한 후 그람 염색법 및 항산성 염색법으로 표본을 제작한다. 이것을 약 1000배로 확대해서 검경한다.

염색표본에서 BCG 이외의 균이 없을 때 적합으로 한다. BCG는 그람 염색 및 항산성 염색에 양성이어야 한다.

유해결핵균부정시험

검체를 생리식염수로 희석해 1 mL 중에 2.5 mg의 BCG 습균을 포함하도록 한 것을 시료로 한다. 체중 300 ～ 400 g의 기니픽을 사용한다. 접종 전 1 주간 이내에 투베르쿨린반응이 음성인 것을 확인한 기니픽 6 마리를 시험에 이용한다. 기니픽 3 마리에 1 마리당 시료 1 mL를 대퇴근육 내에 주사하고 다른 3 마리는 1 마리당 시료 1 mL를 하복부 피하에 각각 주사해서 적어도 6 주간 관찰한다.

관찰기간 중 이상이 없고 관찰기간 마지막에 부검했을 때 주사로 인한 경미한 병변 외의 진행성 결핵병변이나 어떤 이상도 나타내어서는 안된다. 관찰기간 중에 동물이 사망한 경우는 부검해서 진행성의 결핵병변이 없어야 한다. 또한 근육 내 및 피하접종 군 모두 3마리 중 2마리 이상 생존하고 있을 때 적합으로 한다.

균량측정시험

검체를 생리식염수로 희석하여 1 mL 중에 1 mg의 습균을 함유하도록 한 것을 시료로 한다. 분광광도계를 사용하여 파장 470 nm, 광로길이 10 mm에서 흡광도를 측정할 때, 그 값은 각 분광광도계마다 정해진 값 이하이어야 한다.

역가시험

재료

검체를 첨부 생리식염수로 현탁하고 다시 생리식염수로 단계 희석해 1 mL 중에 0.5 mg의 BCG 습균을 포함하도록 한 것을 1차 시료로 한다. 1차 시료를 다시 멸균수로 단계희석해 5 만배 희석액을 조제한다.

시험

이 희석액 0.1 mL을 로벤스타인-젠센(Lowenstein-Jensen) 배지 또는 오가와 배지 1개에 접종한다. 10 개의 검체에 대해 같은 조작을 반복한다. 접종 후 접종한 균액이 배지표면 전체에 퍼지도록 배지를 흔들어 배양용 사면대에 둔다. 이 때 접종균액이 배지 상한을 초과하지 않도록 사면각도를 두꺼운 종이 등으로 조절한다. 배양용 사면대를 약 37.5 ℃의 항온실로 조용히 옮겨 4 주간 배양한다. 배양용 사면대는 배지표면이 건조될 때까지 필요하다. 4 주간 배양 후 발생한 집락 수를 산정해서 통계학적 처리를 한다.

판정

얻은 집락수 평방근의 합계 및 분산값을 통계학적으로 처리해서 검체에 함유된 생균단위를 계산할 때 그 값은 따로 정한 범위 내이어야 한다.

배지

소똥배지 또는 적당한 배지를 사용한다.

글리세린 소담즙 감자배지에 사용하는 소담즙은 광우병 미감염임을 확인한 것을 사용한다.

원액

종균배양

글리세린 소담즙 감자배지 표면에 발육한 균을 소똥 배지에 띄워 심고 균이 충분히 발육할 때까지 배양한다. 발육한 균막을 새로운 소똥배지에 심어 7 ～ 10 일간 배양해서 발육한 균막을 종균배양으로 한다.

주배양과 균막 채취

종균배양을 소똥배지에 띄어 접종하고 7 ～ 10일간 배양한다. 배양종료 전에 배양병 (루병(Roux병)사용)을 관찰해 균막이 배지의 전체 표면을 감싸고 그 발육이 왕성한 배양병을 선정한다. 선정한 배양병 표면에 발육한 균막을 원심법으로 채취한다.

균 배양 후 배지에 대한 시험

균의 배양이 끝났을 때의 배지는 투명하여야 한다.

처리 및 원액 조제

채취한 균막을 멸균수로 씻은 후 원심탈수기를 이용해서 함수량 약 70 %의 습균을 조제한다. 습균에 2 % 글루타민산나트륨 용액을 소량 첨가해 진탕기를 이용해 균질화 후 다시 2 % 글루타민산나트륨 용액을 첨가해 1 mL 중에  습균 120 mg을 포함하도록 해서 균 부유액을 조제한다 (이하 ‘원액’이라고 한다). 원액을 사용하기 까지 2 ～ 8 ℃로 보존한다.

최종원액

원액을 마쇄 후 11 % 글루타민산나트륨 용액을 첨가해 1 mL 중에 습균 80 mg 및 글루타민산나트륨 50 mg을 포함하도록 해서 최종원액을 조제한다. 최종원액을 소정량 채취하여 시험을 한다.

최종원액에 대한 시험

무균시험

검체 20 mL을 채취하여 액상치오글리콜산배지 I (TGC배지)에는 0.5 mL 및 1 mL씩 각각 8 개 접종하고 대두카제인소화배지 (SCD배지)에는 1 mL 씩 8 개에 접종한다. 각 배지의 용량은 15 mL로 한다. 접종 후 검체가 배지 전체에 퍼지도록 조용히 혼합한다. TGC배지는 30 ∼ 35 ℃, SCD배지는 20 ∼ 25 ℃에서 14일간 이상 배양해 5 ∼ 9 일째 및 배양 최종일의 합계 2회, 균의 발육 유무를 관찰한다. TGC 배지 및 SCD 배지 모두 균의 발육을 확인할 수 없을 때 적합으로 한다.

염색시험

검체를 생리식염수로 희석하여 1 mL 중 0.5 mg의 BCG 습균을 포함하도록 한 것을 시료로 한다. 시료 한 방울을 슬라이드 글라스에 떨어뜨리고 loop을 이용하여 넓게 칠한 후 건조해 화염고정한 후 그람 염색법 및 항산성 염색법으로 표본을 제작한다. 이것을 약 1000배로 확대해서 검경한다.

염색표본에서 BCG 이외의 균이 없을 때 적합으로 한다. BCG는 그람염색 및 항산성 염색에 양성이어야 한다.

유해결핵균부정시험

검체를 생리식염수로 희석해 1 mL 중에 2.5 mg의 BCG 습균을 포함하도록 한 것을 시료로 한다. 체중 300 ∼ 400 g의 기니픽을 사용한다. 접종 전 1 주간 이내에 투베르쿨린반응이 음성인 것을 확인한 기니픽 6 마리를 시험에 이용한다. 기니픽 3 마리에 1 마리당 시료 1 mL를 대퇴근육 내에 주사하고 다른 3 마리는 1 마리당 시료 1 mL를 하복부 피하에 각각 주사해서 적어도 6 주간 관찰한다. 관찰기간 중 이상이 없고 관찰기간 마지막에 부검했을 때 주사로 인한 경미한 병변 외의 진행성 결핵병변이나 어떤 이상도 나타내어서는 안된다. 관찰기간 중에 동물이 사망한 경우는 부검해서 진행성의 결핵병변이 없어야 한다. 또한 근육 내 및 피하접종 군 모두 3마리 중 2마리 이상 생존하고 있을 때 적합으로 한다.

완제의약품

함습도시험

함습도 측정법에 따르며, 3.0 % 이하이어야 한다.

pH 측정시험

pH측정법에 따르며, pH는 5.5 ～ 7.0이어야 한다.

무균시험

무균시험법에 따르며 이에 적합하여야 한다. 다만, 각 배지의 용량은 15 mL로 하며, 1인용에서는 1 용기당 접종량은 전량으로 한다.

염색시험

항산성 염색법에 의하여 검경하였을 때 항산성 균 이외의 어떤 균도 발견되어서는 안 되며 또한 균이 고루 분산되어야 한다.

균량측정시험

검체를 생리식염수로 희석하여 1 mL 중에 1 mg의 습균을 함유하도록 한 것을 시료로 한다. 분광광도계를 사용하여 파장 470 nm, 광로길이 10 mm에서 흡광도를 측정할 때, 그 값은 각 분광광도계마다 정해진 값 이하이어야 한다.

역가시험

재료

검체를 첨부 생리식염수로 현탁하고 다시 생리식염수로 단계 희석해 1 mL 중에 0.5 mg의 BCG 습균을 포함하도록 한 것을 1차 시료로 한다. 1차 시료를 다시 멸균수로 단계희석해 5 만배 희석액을 조제한다.

시험

이 희석액 0.1 mL을 로벤스타인-젠센(Lowenstein-Jensen) 배지 또는 오가와 배지 1개에 접종한다. 10 개의 검체에 대해 같은 조작을 반복한다. 접종 후 접종한 균액이 배지표면 전체에 퍼지도록 배지를 흔들어 배양용 사면대에 둔다. 이 때 접종균액이 배지 상한을 초과하지 않도록 사면각도를 두꺼운 종이 등으로 조절한다. 배양용 사면대를 약 37.5 ℃의 항온실로 조용히 옮겨 4 주간 배양한다. 배양용 사면대는 배지표면이 건조될 때까지 필요하다. 4 주간 배양 후 발생한 집락 수를 산정해서 통계학적 처리를 한다.

판정

얻은 집락수 평방근의 합계 및 분산값을 통계학적으로 처리해서 검체에 함유된 생균단위를 계산할 때 그 값은 따로 정한 범위 내이어야 한다.

저장방법과 유효기간

유효기간은 2년으로 한다.

기타

제제규칙 7. 용기 및 포장의 표시항에 규정된 사항과 다음 사항을 기재하여야 한다.

표시사항

“경피접종”이라는 문구

사용법 및 사용량

통상 용제를 가한 것을 상박외측의 중앙부에 떨어뜨려 바르고 경피접종용 침을 사용하여 접종한다.

부    칙

이 고시는 고시한 날부터 시행한다.

클로스트리듐 보툴리눔 A형 독소-혈구응집소 복합체

Clostridium botulinum type A Toxin-Haemagglutinin Complex

정 의

명칭

이 제제는「클로스트리듐 보툴리눔 A형 독소-혈구응집소 복합체」라 한다.

제제

이 제제는 클로스트리듐 보툴리눔 A형 독소-혈구응집소 복합체를 함유하는 동결건조물로서 용제를 가하면 무색의 투명 액상제제이다.

제조방법 및 시험기준

재료

균주

Clostridium botulinum ATCC 3502 Hall주를 사용한다.

배지

동물기원의 여러 성분을 함유한 배지를 사용한다.(TSE 미감염이 확인된 것을 사용한다.)

원액

배양 및 채취

균을 35℃에서 72시간 발효기에서 배양 후 검경 및 적당한 방법으로 검사하여 다른 균으로 오염되지 않은 배양액에서 crude botulinum toxin paste를 얻는다.

추출

Toxin paste를 완충액으로 용해시키고 황산암모늄 침전, 투석 등의 방법을 이용하여 독소액을 얻는다.

정제 및 여과

추출된 독소액을 크로마토그래피법, 황산암모늄 침전과 투석, 멤브레인 필터 등의 방법으로 정제, 여과하여 -20℃에서 보존하며 이를 원액으로 한다.

원액에 대한 시험

성상

균열이 없는 균일한 형태로 -20℃에서 냉동 보관되며 실온에서 녹이면 투명한 무색용액이 된다.

특이역가(Specific Potency)시험

검체의 특이역가는 단백질함량으로 나누어 구한다.

완충액으로 표준액을 희석하여 100 ～ 1,000 ㎍/mL 범위안의 농도가 되도록 일련의 희석용액을 조제한다. 검체도 완충액을 이용하여 1 : 2, 1 : 5. 1 : 10. 1 : 20의 비율로 희석한다.(희석된 검액을 그대로 사용할 수 있지만 검체중 단백질 함량에 따라 25 ～ 1,000 ㎍/mL의 정량 범위안에 들도록 더 희석할 수도 있다.) 희석된 표준액과 검액을 6 μL씩 취해 microplate well에 옮기고 6 μL의 완충액을 공시험액으로 사용한다. 단백질 정량시액을 사용직전에 혼합, 조제하여 300 μL를 검체, 표준액 및 공시험액에 혼합한다. 이 때 거품이 일지 않도록 시액을 천천히 첨가한다. 혼합 후 30분 이내에 570 nm에서 흡광도를 측정하고 각 알부민 표준액의 흡광도로부터 검량선을 작성하여 검체의 단백질 농도를 구한다(mg/mL). 특이역가는 단백질 mg당 2.5 × 107 마우스 LD50 단위 이상이어야 한다. 동일한 표준액과 검액을 이용하여 상기조작을 3 번 반복한다.

역가(Potency)시험

완충액을 사용하여 검체를 8단계 농도로 희석한다. 이 때 희석은 기준범위내의 중간점을 기준으로 하여 1/3log 희석간격이 되도록 한다. 각 농도의 희석액 0.5 mL씩을 4마리의 마우스에 각각 복강내로 주사하고 96시간 사망한 수를 기록하여 Spaerman-Kärber법으로 LD50를 구한다. 1단계에서 얻은 평균값을 기준으로 1/8log 희석간격이 되도록 완충액을 사용하여 이 약을 10 단계 농도로 희석한다. 각 농도의 검액 0.5 mL씩을 16 마리 마우스의 복강내로 주사하고 96시간 사망한 수를 기록하여 Spaerman-Kärber법으로 LD50을 구하며, 역가는 1.5 × 107 마우스 LD50 단위/mL 이상이어야 하며, 다음과 같은 전제가 따른다.

1) 모든실험군들은 동일한 수를 사용한다.

2) 최고농도의 실험군에 속한 실험동물들은 모두 사망하고 최저농도의     실험군에서는 모두 생존해야 한다.

3) 대수등간격으로 희석한다.

4) 용량-반응 곡선이 대칭형이어야 한다.

[eqn: m=log { LD}_{50 } = { CHI }_{k } - d(S-0.5)]

s = log SE(표준오차) = d√[Sumipi(1-pi)/(ni-1)]

X0	반응율이 0%인 모든 용량중 최대 용량(또는 용량대수)

Xk	반응율이 100%인 모든 용량중 최소 용량(또는 용량대수)

Sumi	X0에서 Xk까지의 합계

d	용량사이의 간격(또는 비의 대수)

pi	i번째 용량군에서 반응한 동물의 비율

S	Sumipi 반응한 동물 비율의 총합

ni	i번째 용량군에서 시험한 동물의 수

미생물오염시험

0.1% 트립톤수를 이용하여 검체를 10-2 농도까지 10 배 단위로 희석한다. 희석된 각 검액 100 μL씩을 피펫으로 6 번씩 취하여 6 개의 TSBA plates에 옮긴다. 희석하지 않은 검액도 100 μL씩 취하여 6개의 TSBA plates에 옮긴다. 각 농도의 검액들이 고루 퍼지도록 부드럽게 저어주고 배양하기 전 완전히 흡수되도록 방치한다. 희석된 각 검액 중 2개의 평판을 20 ～ 25℃와 30 ～ 35℃에서 호기적으로 배양하고 나머지는 30 ～ 35℃의 혐기 상태에서 배양한다. 3일 후 30 ～ 35℃의 호기 및 혐기적으로 배양된 평판의 집락수를 기록하고 7일후에는 20 ～ 25℃에서 배양된 세균 또는 진균의 집락수를 기록한다. 총 호기/혐기성 세균의 수는 100 CFU/mL 미만이어야 한다.

마우스중화시험

검체를 2000, 200, 20 LD50/mL의 농도가 되도록 완충액으로 희석한다. 50 ～ 100 IU에 해당하는 항독소 0.1 mL를 각 농도의 검액 2.4 mL에 가한다. 이 독소/항독소 혼합액을 20 ± 2℃에서 1시간동안 배양한다. 따로 각 농도의 검액 2.4 mL를 취하고 완충액 0.1mL를 가하여 배양한 다음 대조군으로 한다. 시험군 및 대조군의 혼합물 0.5 mL씩을 4 마리의 마우스에 복강내로 주사하여 4일간 관찰하고 사망수를 기록한다. 대조군에 속한 4 마리 마우스는 4일 이내에 모두 사망해야 하며 시험군에 속한 마우스들은 모두 시험기간 동안 생존해야 한다. 시험군의 마우스 중 한 마리라도 사망할 경우 실험을 다시 하고 재시험에서도 마우스가 사망한다면 검체는 부적합한 것으로 판정한다.

최종원액

원액에 안정화제로 HIV등 미생물오염이 없는 인혈청알부민과 부형제로 락토스액을 가하여 최종원액을 만들고 무균여과 후 분주 및 동결건조 한다.

최종원액에 대한 시험

무균시험

무균시험법에 따르며 이에 적합해야 한다.

완제의약품

pH 측정시험

pH 측정법에 따르며, pH는 5.5 ～ 6.2이어야 한다.

용해도시험

바이알을 개봉하여 2.5 mL의 생리식염수를 가하고 부드럽게 젓는다. 이후 투명한 용액이 될 때까지 걸린 시간을 측정할 때 60초 이내에 용해되어야 한다.

함습도시험

함습도측정법에 따르며 2.0%미만이어야 한다.

엔도톡신시험

엔도톡신시험법에 따르며 바이알당 1.5 EU 미만이어야 한다.

무균시험

무균시험법에 따르며 이에 적합하여야 한다

단백질함량시험

검체를 2.5 mL의 증류수에 용해시킨다. 표준액, 검액 및 공시험액 0.2 mL를 각각 시험관에 옮기고 여기에 Coomassie  Blue시액 1.0 mL를 가하여 혼합한 후 30분간 배양한다. 표준액과 검액의 흡광도를 595 nm에서 측정하고 공시험액으로 보정한다. 표준액들의 흡광도로부터 단백질농도 곡선을 구하고 이를 이용하여 검액의 농도를 측정한다. 단백질의 농도는 바이알당 101 ～ 139 μg이어야 한다.

확인시험

9 개의 바이알을 취해 내용물을 0.5 mL씩 완충액으로 녹인다. 이중 5 개의 바이알에 항독소 0.2 mL (100 IU)를 가한 후 37℃에서 1시간 배양한다. 남은 4 개의 바이알에 항독소 0.2 mL (100 IU)를 가하고 37℃에서 1시간 배양한다. 여기에 완충액 1.8 mL씩을 가해 총용량이 2.5 mL가 되게 한다. 체중 17 ～ 22g의 5 마리 마우스의 체중을 단 후 처음 항독소로 중화시킨 5 개 바이알의 각각 0.5 mL를 마우스의 복강에 주사한다.

체중 250 ～ 350 g의 두 마리 기니픽의 체중을 단 후 나중에 완충액과 혼합한 4 개의 바이알에서 5 mL씩을 취해 기니픽의 복강에 주사한다.

실험동물들을 7일간 매일 검사하여 사망 및 임상적 변화를 기록하고 7일째에 살아있는 동물들의 체중을 기록한다. 실험동물 모두 7일간의 실험기간동안 생존해야 하고 눈으로 볼 때 건강상의 이상 징후가 보이지 않아야 한다. 마지막날 기록한 체중이 주사직전의 체중보다 적지 않아야 한다. 두 가지 실험동물중 어느 한쪽에서 한마리 또는 양쪽 모두 한 마리씩 사망하거나 이상징후가 보이면 실험을 반복하고 재실험에서도 기준에 충족되지 않을 경우에는 부적합으로 판정한다. 두 가지 실험동물 중 어느 한쪽 또는 양쪽 모두 2 마리 이상이 사망하거나 이상 징후가 보이면 부적합으로 판정한다.

*이 시험의 판정기준은 식품의약품안전청 예규 제 139호 ◉시험검정결과 판정에 관한 규정에 해당되지 아니한다.

역가시험

완충액으로 검체를 희석하여 각 바이알당 약 1/8log 정도의 동일간격이 되도록 5 개 농도의 검액을 만든다. 총 6 개의 바이알로부터 5 가지 농도의 검액을 조제하여 각 검액당 8 마리의 마우스에 대해 시험한다. 한 개의 바이알에 0.25 mL의 완충액을 가하여 용해시키고 이중 0.15 mL를 취하여 44.77 mL의 완충액을 가해 모액 A로 한다. 모액 A중 30 mL를 취하여 완충액 9.9 mL를 가하고 이를 모액 B로 한다. 모액 B를 이용하여 아래 표와 같이 5개 농도의 검액을 조제한다. 각 희석액 0.5 mL를 8마리의 마우스의 복강 내로 주사하여 72시간동안 사망한 숫자를 기록한다. Spaerman-Kärber법을 이용하여 계산한 역가는 바이알 당 400 ～ 600 마우스 LD50단위이어야 하며, 최고농도의 실험군에 속한 실험동물들은 모두 사망하고 최저농도의 실험군에서는 모두 생존해야 한다.

저장방법과 유효기간

유효기간은 허가기준에 따른다.

기타

제제규칙 7. 용기 및 포장의 표시항에 따른다.

부    칙

이 고시는 고시한 날부터 시행한다.